Biotechnologie 2

Rek. Proteinproduktion, 2021-06-30

Erklären Sie die Möglichkeiten des Tet Systems für die Regulation der Genexpression in der Proteinproduktion.

Bei Säugetierzellen verwendet man entweder starke, konstitutive Promotoren oder man reguliert die Expression über das Tet-System. Dieses basiert auf dem E. coli Tetracyclin-Resistenzoperon.
 
Möglichkeiten:
(a) Das Tet Operon kontrolliert die Transkription des TetA Genes durch Bindung des Tet Repressors TetR an das TetO element. Tetracyclin (Tc) bewirkt Anschaltung .
 
Adaptierung des Tet Operons

(b) Tet-off: Fusion des TetR mit dem VP16 (Herpes simplex) ergibt einen starken transkriptionellen Aktivator, dessen Aktivität in Gegenwart des Tetracyclinanalogs Doxycyclin (dox) abgeschaltet ist.

(c) Tet-on: Ein 4 AS Austausch führt zu rekombinanten rTetR, aktiv in der Gegenwart von Dox, in Abwesenheit von Dox inaktiv ist.

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