Biotechnologie 2

Weiße Biotechnologie

Beschreiben Sie die Herstellung von Nucleotiden durch RNA Hydrolyse?

Background:
  • Hefen besitzen zur Gewinnung von RNA ein sehr günstiges RNA/DNA Verhältnis.
    • z.B. Candida utilis 10 – 15 % RNA in Trockenmasse auf Medien mit niedrigem C/N Verhältnis (z.B. Melasse)
    • Kann durch Zn2+ + Phosphatzugabe weiter erhöht werden.
    • Vor allem rRNA.
 
Herstellung:
  1. Extraktion mit heißer alk. Kochsalzlösung
    • 5-20 % NaCl (100 °C, 8 h, pH 9)
  2. Weitere Reinigung durch Umfällen mit HCl oder EtOH.
  3. Enzymat. Hydrolyse mit Nuclease P1 aus Penicillium citrinum oder Streptomyces aureus
    • liefert Nucleosid 5' Monophosphate (Entfernt werden vorher 5‘-Nukleasen oder Phosphatasen!)
  4. Aufarbeitung von 5'-NMP (insb. IMP und GMP)
    • Adsorption an Aktivkohle
    • Ionenaustauscher-Chromatographie
    • Fraktionierte Fällung mit MeOH

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