Biologie Q1-Q4

Wie verläuft die PCR sowie der RFLP & wofür sind sie nützlich?

Polymerasekettenreaktion
  • Zur DNA-Vervielfältigung ähnlich der DNA-Replikation
  • Exponentielle DNA-Vervielfältigung über drei mehrfach wiederholte Schritte 
  • Verwendung von Thermocyclern welche automatisch Versuchsbedingungen steuern wobei Temperatur, Zeit pro Reaktionsschritt & Zyklenanzahl programmierbar sind
  • Verwendung künstlicher Primer aus 15-30 Nukleotiden die zu den Enden des zu vervielfältigenden DNA-Abschnitts komplementär sind
    • Sequenz muss daher bereits bekannt sein
    • Für gleichzeitige Replikation an beiden Strängen Verwendung gegenläufig orientierter Primerpaare
  1. Denaturierung
    • Erhitzen auf 90-100° C wird Matrizen-DNA geschmolzen (H-Brücken gelöst) ⇒ DNA-Einzelstränge
  2. Hybridisierung
    • Beim Abkühlen des Gemisches auf circa 50°C binden synthetische Primer an komplementäre Matrizen-DNA-Sequenzen
  3. Polymerisation
    • Zur Matrizen-DNA werden Komplementärstränge synthetisiert
      • Hitzestabile Taq-Polymerase aus thermophilen Bakterien mit Temperaturoptimum von 72°C
Restriktions-Fragment-Längen-Polymorphismus
  • DNA verschiedener Individuen besitzen unterschiedliche Schnittstellen für Restriktionsenzyme
    • Nutzung für Vaterschaftstest oder forensische Anwendungen
  • Bestimmte DNA-Abschnitte werden mittels PCR vermehrt und darauf mit einem bestimmten Restriktionsenzym verdaut und die entstandenen Fragmente mittels Gelelektrophorese aufgetrennt
    • Das entstehende Bandenmuster ist individuell verschieden

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