Molekulare Klonierung Durchführung

1.Plasmidisolierung + Aufreinigung (Midi oder Mini)
2.Restriktionsverdau (mit 2 Restriktionsenzymen Typ2)
3.Gelelektrophorese (Präparatives Gel - Salze,Enzyme loswerden,)
dann Bande ausschneiden am UV Tisch
4.Gelextraktion (Gel lösen, Plasmid über Silica-säule gewinnen und säubern)
5.Kontrollgelektrophorese (nur weing auftragen + Konzentration bestimmen)
6.Ligation (Insert in Vektor+ Puffer,Ligase,ATP)
7.Transformation (CaCl2+Hitzeshock um Plasmid in Kompetente Zelle zu bringen) danach regenerieren lassen auf Eis
8. Selektion Vermehrung über Nacht (zB Selektionsmedium und Blue White)
10. Kontrolle durch Plasmidisolation, Restrikstionsverdau (gleiche Enzyme wie vorher nutzen), Gelelktrophorese
 

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