Biotechnologie 2

Rek. Proteinproduktion

Beschreiben sie wichtige Eigenschaften der rekombinanten Proteinproduktion in Pichia pastoris ?

P. pastoris hat S. cerevisiae oft als eukaryontischer MO zur rek. Proteinproduktion abgelöst.
V.a. im Labormassstab, aber immer mehr auch Industrie.

Korrekter wissenschaftliche Name ist eigentlich: Komagataella phaffii

  • Extrem hohe Zelldichte (120 DCW g/l)
  • Methylotrophe Hefe: Methanol als C-Quelle
  • Dominantes Protein bei Wachstum auf Methanol: Alkoholoxidase: bis 30% des Gesamtproteins
  • Alkoholoxidase AOX1 Promotor wird durch Methanol sehr hoch induziert und durch Glukose reprimiert.
  • Kommerziell erhältliches Expressionssystem. Forschung
  • Genom(e) sequenziert.

  • Intrazelluläre- und Extrazelluläre Expression möglich
  • Möglichkeit der Integration ins Genom (Schnitt mit Restr. Enzym: lineare Transformation) oder episomal (Plasmid, zirkuläre Transformation): Stabilität!
  • Einsatz v. Shuttle Vektoren (binärer Vektor): Kann sowohl in E. coli wie P. pastoris verwendet werden, da er für jeden Organismus einen Replikationsstartpunkt bzw Selektionsmarker (Zeocin) besitzt.

Diskussion