Insulin: Beschreiben Sie Synthese und Reifung. Wie wird es rekombinant hergestellt (ohne Protein Engineering) und welche Alternativen gab es vor der rekombinanten Herstellung.

Question

Answer 1

Insulin:

Pankreatisches Hormon
Typ I, II Diabetes.

Rekombinante Herstellung:

In E.coli werden die A- und die B-Kette des Insulins in zwei separaten Kulturen exprimiert.
Jeweils ein Vektor mit dem für die Ketten codierendem Gen, sowie einem β-Galactosidase-Tag wird in E.coli transformiert, welches ein β-Gal-Insulin-Fusionsprotein produziert.
Diese werden über Affinitätschromatographie über eine Säule mit β-Gal Antikörpern aufgerreinigt und der Insulinanteil vom β-Gal-Anteil durch CNBr-Behandlung abgetrennt
Die A- und B-Kette werden dann zusammengebracht und das Insulin kann reifen (Disulfidbrücken bilden sich aus)
Reifung des Insulins führt zu 2 kettiger Form. Proteinketten nur noch durch Disulfidbrücken verbunden.

Früher:

Zuerst Insulin aus Rinder- und Schweinepankreas gewonnen. Aber AA Unterschiede führten zur Immunantwort und AK Bildung.
Probleme waren auch etwaige Verunreinigungen oder BSE
Semisynthese des Insulins: Verbesserung der Anwendung durch Modifikation des Insulins: Für Schweine spezifisches Alanin ersetzt durch Threonin. Synthetisches Octapeptid ersetzt C-Terminus nach Abspaltung mit Trypsin.

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