Design ofg Biological Molecules and Systems

Wie erfolgte FACS am Beispiel der Yersinia mollaretii phytase (YmPh)? -> Whole cell screening

 
- im ersten Schritt wird Glucose-6-Phosphat durch YmPh hydrolysiert und ß-D-Glucose sowie anorganisches Phosphat entlassen
- die Glucose-Oxidase setzt die ß-D-Glucose zu gamma-Gluconolacton um, dabei wird Wasserstoffperoxid gebildet
- wenn bei der Wasserstoffperoxidbildung Fe2+-Ionen anwesend sind, entstehen OH-Radikale (Fenton's Reaktion)
- in Anwesenheit der OH-Radikale polymersieren Polyethylenglycoldiacrylat und 1-Vinyl-2-Pyrrolidinon und Polyfluor 570 zu einem fluoreszenten Hydrogel -> aktive YmPh-Varianten werden angezeigt
- Zellen sind mit Hydrogel umgeben -> werden aussortiert und in MTP weiter kultiviert
- WIrksamkeitsnachweis für alle Phytasen
- gibt es bisher auch für Hydrolasen

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