Design ofg Biological Molecules and Systems

Wahres Subtrat vs. Pseudosubstrat

- oft sind die wahren Substrate (wie zb Säure oder Ester von chiralen Alkoholen) schwierig für HTS
- daher müssen Pseudosubstrate verwendet werden, die zb chromophor oder fluorogen sind
-> You only get, what you screen for
 
- Beispiel: die eigentliche Reaktion durch die WT-Esterase ist die Spaltung vom Substrat in Loracarbef und p-Nitrobenzol (Säure und Alkohol)
- durch Verwendung eines Pseudosubstrates entsteht ein bei 405 nm-absorbierendes Produkt (p-Nitrophenol)
 
- ABER: Pseudosubstrat und Substrat sind nicht dasselbe
- die durch Screening gefundenen verbesserten Varianten müssen mit dem wahren Substrat ge-rescreent werden -> Beispiel: mit Pseudosubstrat ist verbesserte Variante 24x mehr aktiver als WT-Enzym
- mit wahrem Substrat ist verbesserte Variante nur 4x aktiver

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