Biotechnologie 2
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Rek. Proteinproduktion

Was sind Inclusion Bodies? Nennen Sie Strategien, um die Produktion von Inclusion Bodies in E. coli zu verhindern.

Bildung von Proteinakkumulationen im Cytoplasma, tw auch Periplasma.
  • Einschlusskörper
  • Inclusion oder refractile Bodies
  • Grösse 0.5–1.3 μm
  • amorph bis parakristallin
 
Strategien zur Verbesserung der Löslichkeit:
  • Empirische Bestimmung des optimalen Expressionssystems:
    • Wirtsstamm, Plasmid und Plasmidkopienzahl, wie auch die Promotor Sequenz beeinflussen die Produktexpression wie auch die Neigung des Produkts als Inclusion Bodies zu akkumulieren.
      • Schwächere Promotoren, um die Rate der Proteinexpression zu verringern
      • Verwendung von Low Copy Plasmide bzw Genomintegration
      • --> Langsamere Proteinproduktion --> ev. weniger Inclusion Bodies
  • Expression als Fusionsprotein: Fusion zu einem auch in hohen Konzentrationen löslichen cytoplasmatischen Protein verhindert die IB Bildung.
  • Coexpression von Chaperones: Faltung verbessern
  • Erhöhung der endogenen Produktion von Cofaktoren oder ihre externe Zugabe
  • Wachstum der rekombinanten Zellen unter der optimalen Wachstumstemperatur (weniger Stress).
 
Inclusion bodies are often made of denatured aggregates of inactive proteins. Although, the renaturation of inclusion bodies can sometimes lead to the solubilisation and the recovery of active proteins, the process is still very empirical

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