Biotechnologie 2
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Rek. Proteinproduktion

Warum werden Regulatoren wie LacI in der Proteinproduktion verwendet? Wie läuft das in der Praxis ab?

Grundsätzliche Antwort:
  • Weil es sonst durch zusätzliche Repressorbindungsstellen zur Titration des Repressors kommt und dadurch die Regulation noch stärker leaky wird!
  • In der Praxis werden zusätzliche lacI Gene eingesetzt, damit mehr Repressor gebildet wird (oft direkt am Expressionsvektor)
  • Es wird auch häufig ein Mutierter lacI Promotor lacIQ eingesetzt, der zu höherer Expression des Lac Repressors führt (ca. 10x)


 
  • Repressoren werden meist nur in geringen Mengen produziert, aber zusätzliche Kopien der Repressorbindungsstelle werden durch die Expressionsplasmide eingebracht. Führt zur Titration des Repressors.

  • lac-Promoter und davon abgeleitete Hybridpromotoren sind leaky und werden daher durch Insertion einer lac-Operator Sequenz und der Expression des Lac Repressors (LacIq) reguliert.
  • Kohlenstoff Katabolit Repression weiters durch Zugabe von 1% Glukose ins Kulturmedium.
 
  • lac Promoter des lac Operons: Lactose oder IPTG Induktion, reprimierbar durch Glukose.
  • lacUV5 Promoter weniger stark reprimierbar, besitzt keine Katabolitrepression, wodurch die Genexpression nicht durch Glucose gehemmt wird.

  • Nachteil: „leaky“ durch die Titration des Repressorproteins LacI (10 Moleküle pro Zelle).
  • Mutierter lacI Promoter: lacIQ führt zu höherer Expression des LacI (ca 10x).

 
 

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