Biotechnologie 2

Rek. Proteinproduktion

Welche Alternative gibt es in E. coli zur Proteinproduktion ins Cytoplasma? Erklären sie das System und in welchen Fällen es vor allem sinnvoll ist.

Bevorzugte Expression ist in vielen Prokaryonten die Expression ins Cytoplasma. Problem: Verhinderung der Disulfidbrückenbildung im reduzierenden Umfeld des Cytoplasma
 
Alternative ist der Export z.B. ins Periplasma (3 in Skizze) oder Lokalisation in der Zellwand.
 
 
Vorteil:
  • Man muss Zellen unter Umständen nicht aufschließen (Homogenisieren)
  • Faltung im nichtreduzierenden Umfeld des Periplasma. (--> Disulfidbrückenbildung)
    • Sonst kann es zu Inclusion Body Bildung kommen
    • Oder verminderte/falsche Faltung und Funktion zerstört
 
Bsp: pET Dsb Fusion System:
Fusionsprotein zu periplasmatischen Enzymen (DsbA•Tag oder DsbC•Tag) die die Bildung und Isomerisierung von Disulfidbrücken ermöglichen.

Dsb: Disulfid-oxidoreductase
--> Wichtig für Bildung und Isomerisierung von Disulfidbrücken
--> Man kann zusätzlich die Faltung verbessern!
--> Und Protein zum Periplasma lokalisieren

Wann sinnvoll?
  • Um Inclusion Body Bildung zu verhindern
  • Wenn richtige Faltung und Disulfidbrücken wichtig sind

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